关联审评"零发补"通过！微谱成功助力吉林敖东延吉药业产品获批上市
2024/10/12
技术共探丨点击探清生物制品无菌检查方案（下）
2022年03月16日
上期，我们介绍了生物制品无菌检查法的概念、基本要求、国内外技术方法对比、现阶段的检测方法等内容。本期我们继续聚焦无菌检查法，深度剖析各检测方法的优劣，适用性试
4. 各种检测方法的优劣势分析
4.1 传统法-直接接种法
图1中国药典 [1]
图2美国药典 [3]
4.2 传统法-薄膜过滤法
该方法优点在于检出率高、检测量大、操作污染风险小；缺点则是成本较高、程序繁琐、技术要求高。如果想扩大样品的单次检验量，提高检出率，推荐采用薄膜过滤法，检测流程见下图。
图3中国药典 [1]
图4美国药典 [3]
4.3 无菌快速检验方法[2]
01 ATP生物发光
主要用于限度实验和环境监测，基质中ATP会干扰计数结果，造成灵敏度不够高。
02 电阻抗技术
食品行业应用较多，培养基基质干扰严重，污染菌数较少时，结果不稳定。二氧化碳比色-灵敏度较高，阳性菌最低检出度＜10CFU/ml。早在2004年，美国Genzyme就获得了FDA的批准，在无菌测试中应用该方法。
03 荧光染色技术
具有较高的准确性和重复性较好，然而需要较高辨识度的荧光染料，操作程序复杂，成本较高。世界范围内，该方法更多应用在食品、饮品、化妆品、环境及其医疗过程等。
04 流式细胞技术
可以快速检测的方法，但硬件投入较大，对于基质的要求相对较高，高背景干扰导致LOD无法与药典无菌检查法相一致。
05 CO2检测技术
推荐方法：CO2 检测技术
优点：
1. 直接接种培养物，不受产品相关浊度的干扰
2. 培养时间短、操作简单
3. 自动数据分析、获取报告和存档
缺点：
1. 成本较高
2. 方法验证复杂
3. 技术要求高
推荐因素
如果待检样品数量有限（如细胞库、病毒库）、效期较短、价格昂贵、想扩大样品的单次检验量，提高检出率或样品不易溶解，粘稠，不易过滤，推荐采用CO2 无菌快检方法。
结论
综上，CO2 比色技术干扰少，灵敏度较高，因此CO2 检测技术在生物制品行业目前应用范围最为广泛，成为无菌替代方法中的首选！
5. 无菌检查的方法适用性试验[2-9]
我们知道，在进行供试品的无菌检查前，必须要开展供试品的无菌检查方法适用性试验。那么，究竟为何要进行供试品的方法适用性试验呢？答案是为了保证检验的准确与真实，保证检验的严谨性。
国外药典很早就有了无菌检查方法学的验证试验，《中国药典》（2005年版）开始收载方法学的验证，并规定，当建立药品的无菌检查法时，应进行方法验证试验，以确认所采用的方法适合于该药品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。
由于传统无菌检查方法包括直接接种法和薄膜过滤法，都是药典里规定的法定方法，因此日常中使用此方法进行供试品的适用性试验及样品检测遵照药典开展即可。然而，无菌快检法并不在法规规定的方法中。无菌快检法是《中国药典》2020版 9201药品微生物检验替代方法验证指导原则中允许的方法。
那么，满足哪些条件才能使用快速方法呢？如果我们想要采用无菌快检法，首先需要进行微生物检验替代方法验证。验证的指标包括专属性、检测限、耐用性和重现性。与药典传统方法进行比对，如果验证结果优于或一致，则可以用无菌快检法代替传统培养法。如果验证结果劣于或低于传统方法，则不可代替传统法。与传统方法一致，每个样品检查前均需进行方法适用性试验。
6. 微谱无菌检查解决方案
对于无菌检查，微谱可以根据不同客户需求，不同样品种类，提供多元的定制化无菌检查方案。
一对一定制化服务
针对供试品数量有限的细胞库和病毒库，及不易溶解或质地粘稠的原辅料，我们可以制定与产品一对一的直接接种法方法适用性试验及无菌检查法。
能力覆盖多元方法
根据客户需求想扩大单次检验量，提高检出率的供试品，我们可以提供薄膜过滤法方法适用性试验及无菌检查法。
专业的无菌快速检验
针对供试品的效期短、价格昂贵、数量有限、不易溶解、粘稠或者想要提高检出率的需求，我们可以根据不同产品提供无菌快速检验方法，包括无菌检查替代验证方案、替代方法验证、方法适用性试验及检测服务。
满足中美欧药典需求
我们提供的服务符合《中国药典》、《欧洲药典》、《美国药典》等国内外法规要求。
精准 有效 快速 合规
依据客户样品类型，提供更加精准、有效、快速、合规的无菌检查方法适用性试验方案和技术服务。
【参考文献】
[1]《中国药典》2020版 三部和四部1101无菌检查法
[2]《中国药典》（2005年版）三部和四部1101无菌检查法
[3] 中国药典分析检测技术指南—国家药典委员会编著2017.07出版(1)
[4]《中国药典》2020版 9201药品微生物检验替代方法验证指导原则
[5]《美国药典》1223 VALIDATION OF ALTERNATIVE MICROBIOLOGICAL METHODS微生物替代方法的验证
[6]《欧洲药典》5.1.6 Alternative methods for control of microbiological quality控制微生物质量的替代方法
[7]《PDA》TR33 Evaluation, Validation and Implementation of New Microbiological Testing Methods可选择的和快速的微生物检测方法的评价验证与执行
[8]《中国药典》通则征求意见稿 胞类制品微生物检查法 2021.10.26—国家药典委
[9]《中国药典》（2005年版）三部和四部1101无菌检查法
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