闪“藥”泰州-速记放送3|包材密封性研究中的关键点及商业化检漏方法的建立及验证分享

演讲主题：包材密封性研究中的关键点及商业化检漏方法的建立及验证

讲师：微谱微生物及密封性研究中心    技术总监 顾寒妮

简介：顾寒妮，拥有20余年医药检测领域丰富的项目开发经验，熟悉仿制药一致性评价、CCIT等一系列法规指导要求，多次成功通过CMA评审。独创了目前国内唯一一家完全符合FDA要求的微生物学测试的条件设定，更实现短期内开发建立注射剂包材密封性的整体研究方案。

大家好！微谱在刚开始有指导性原则时已经开始了研究，进入市场会晚一些，我想说密封性研究相对于相容性研究来说，可以有更多的交流。因为相对于相容性来说，每个工厂都会自己进行研究，不管是硬件软件相对于相容性都会高一些。

首先，在这里，对于熔封产品是需要做百分百检漏的，玻璃安瓿肯定属于熔封产品，那么BFS到底要不要做百分之百检漏，因为这个要求比较高。对于现在得到的一些信息来说，也要做百分之百的检漏。

我们要知道为什么要做密封性，现在对于药品注射性来说为什么呢？因为对于密封性来说最大风险是“微生物风险”，但是除了微生物之外，有些产品，像氢氧化钠注射液需要二氧化碳保持，对气体流失要求比较高。至少要采用两种方法，其中一种必须是微生物挑战性，为什么？对于注射液来说的微生物要求最高，如果能发现微生物的风险，并且有另外一种风险来控制微生物风险的话，相对来说密封性要求相对于现在来说是达到了科研要求的。在一致性评价里面，我们要注意稳定性要求。一般来说，0期和终点我们要无菌检查。像客户来问我们，申报资料要几个时间点的密封性稳定性数据，我们现在说的是不能低于6个月的研究数据。

跟大家分享一下，从去年到现在做了这么多案例后，我们把一些注意点，与各位大家交流、分享。第一，包装密封性研究方法。在国内没有什么具体的方法，如果大家看到要求，大多数还是遵循USP1207，其中微生物挑战法、色水法、气泡法属于概率性方法；高压放电法，激光顶空，质量提取法、真空衰减法、压力衰减法属于确定性方法。如果大家看到老师发补意见的话，微生物侵入，就是对菌种、菌液浓度、压力和时间方面做研究。对于菌种，大家如果做过除菌过滤验证的话，要求的是缺陷短波，因为如果最小的且有运动性的微生物都不能侵入，那相对来说是就是安全的。侵入压力和侵入时间，对于每个实验室来说是有不同的，需要自己根据验证结果结合产品最严苛条件。

从色水法说，我们微谱实验室这方面是小弟弟，对于企业来说可能用了很多年了。我相信在座各位工厂都用过或者正在用色水法，之前的色水法能检漏是什么漏呢？现在又是多少呢？很可能5微米、10微米等，我们在开展色水法的时候，我们同时让工厂提供已有的色水条件，我们会做预实验，结果表明大多数工厂的现有色水最多只能做到50微米。但可以说，50微米是远远不够的。但是对于工厂来说，更改参数来讲是非常困难的，因为整个工艺都要进行改变，我们还是一句话“质量和产能一定要找一个平衡点”，这时候要不换设备，要不用其他方法来改变色水法，这个必须要百分之百检漏，而且大多数都是用色水法的。

还有我们的色水种类。一般用的都是亚甲蓝，但是随着环保要求越来越严格，对亚甲蓝的使用限制越来越严，这时候要换另外一种色水。再看一下色水浓度，这个要求很高，之前色水浓度低，因为只能检到大漏，现在3微米、5微米在很短时间压力下能进入多少色水呢？所以色水浓度是非常重要的。

我在做色水浓度的时候，会发现有一些工厂之前用的色水是食品类的染色剂和复合材料，我们把市场上能找到的一些工厂现在在用的色水染料进行电镜扫描，发现粒径分布大于1微米的很多。但是分析纯的染色剂会分布在30-40纳米左右。还有就是保压时间和压力，在工厂一般会做色水，一点空隙都没有，不管正压还是负压都毫无意义。还有的工厂是在120压下保持了30分钟，我们当时直接跟客户联系，这也是后面发觉的，给我们的设备改进提供了很大的帮助。在正压阶段工厂已经放色水了，一边在排放色水，一边再加正压，为什么我们投入生产会晚一点呢？因为我们要想得到一种设备起码能模拟整个工厂的设备条件，不管是加色水、放色水，还是整个压力。

说到冻干粉，这个能不能做色水呢？是完全可以的。这是胭脂红，棕色瓶是不是做不出来？可以做出来，但是灵敏度会低一点，大约在10微米左右。这是透明的胭脂红5微米。这是胭脂红到了5微米，如果没有阴性对照的话，是非常难发觉的。如果自己做色水挑战的话，又是棕色瓶的话，还是推荐亚甲蓝。

这是气泡法。相对来说气泡法采用公司比较少，而且提交资料比较少，一般什么情况才会用气泡法呢？我放了一个动图，这是打的5微米的孔，很明显可以看到泄漏，这个是规则的，是明确可见的。

再说一下高压放电。如果工厂有高压放电设备我们回味工厂会提供在线现场验证服务，因为高压放电其实要求一些参数（转速、电压）等需要现场调试。

我们之前跟工厂对接过、沟通过，一般2毫升规格安瓿装1毫升的液体，高压放电是做不出来的。高压放电原理，我的包材是绝缘，我的内容物是导电的，我在高压放电过程中如果检到泄漏电阻会下降，电压就会有明显变化。如果装量不够，就算通过漏孔也是不导电的。在转速方面，转速越快，灵敏度越高，电压越高，灵敏度越低，两者必须达到平衡点。

在真空衰减方面是抽压，压力衰减不适用于没有顶空的样品，这是为什么呢？压力衰减是产生一个压差，我的压差是可以测到的，如果没有顶空是不可以的。真空不管是液体还是气体都可以抽出来，如果在轧盖不是很紧实的状态下，压力衰减一加压就压紧实了。为什么在冻干制剂上要拿出来试一下？我自己做出阳性产品后会进行抽压，看一下是否漏，真空衰减不是看制剂是不是会堵孔，而是看蒸气压，所以饱和蒸气压是要通过实验做的。

真空衰减和压力衰减对湿度要求很高，我希望在实验室放一台抽湿机，才能达到保持湿度的目的。

这是我们的激光打孔。之前激光打孔我们不是自己来操作的，但是因为我们发觉激光打孔非常重要，孔径就是我们的灵敏度，阳性瓶就是有标准孔径的瓶子，如果放到其他化学验证比如说液相色谱法当中就是孔径就等于是标准品，如果标准品作为一把尺子，本身不准的话，量的东西就是不准。为什么只说激光打孔呢？因为激光打孔相对其他方法来说是更接近于自然环境下产生的一个泄漏状态，激光打孔分三种孔，首先是圆锥孔，这是一个洞，表面比较大，它从外表看就是一个洞，一般来说国内激光技术达到的都是圆锥孔，如果我调一下参数会达到O型裂纹孔，这个裂纹相当于于3微米或5微米孔径，裂缝更接近于自然状态下的裂开状态。而更完美的是X型裂纹孔。我们在整个激光打孔团队研究下来，大部分能达到O型裂纹，一部分能达到X型裂纹，不久的将来我们会达到完全都是X型裂纹，因为X型裂纹更接近平常的状态，这个是更接近于真实的数据。

如果在我们公司进行真空衰减后会提供一个解决方法，我们会要求厂家提供测试方法和参数，这个是什么呢？一个绝压，一个差压。

再讲一下发补案例。可以说，收到的发补都是整齐划一的，像本品采用色水法进行封闭性检查、未制备阳性对照，未考察灵敏度，未进行微生物侵入试验等；建议参考USP1207等相关技术，继续完善包装系统密封性研究方法等。

我们现在看到所有的密封性都是参考USP1207，国内没有跟USP 1207相关性的研究指导规则。如方法灵敏度无法达到产品最大允许泄漏限度水平，建议至少采用两种方法进行密封性验证，这样保证所有产品都没有微生物侵入风险的，这就是所说的关联。与密封完整性有关的工艺参数应经过确认并进行适当控制。我的产品加大了胶塞怎么办？我的生产环境下是什么样的？如果没有的话，色水法是不实用的，这时候会进行抽样真空衰减检查。

当时是在去年5月份，我们做了3微米、5微米、10微米、15微米、我们发现在3微米的时候，就能发现侵入，我们当时定下3微米是灵敏度，但是客户说15微米时是百分之百的侵入，那么15微米百分之百侵入的点才是灵敏度。当时我们是觉得这有点问题，但是后来CDE老师的线上培训中也说了，微生物侵入法的灵敏度就是百分之百侵入的那个点，而不是20%、70%，如果需要20%、70%是10个样本量的20%、70%，还是20个样本量的20%、70%？还是50个样本量的20%、70%？微生物实验本身不是确定性的实验，只能微生物当中可控手段来确保有效性，最后来看微生物侵入的可靠性。