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项目介绍

质量研究:特性鉴定

蛋白质类制品的一级结构是包括二硫键连接在内的氨基酸序列,是蛋白质高级结构、作用机制及生物学活性的基础。由于其本身结构复杂的固有属性,通常情况下,需要通过分子量、质量肽图、二硫键及N糖谱鉴定等多维度互补的技术分析手段进行研究。根据ICH Q6B《质量标准:生物技术产品以及生物制品的检测方法和可接受标准》、《中国药典》2020版三部中“人用重组DNA蛋白制品总论”及“人用重组单克隆抗体制品总论”、各国药典及指导原则等要求,微谱大分子药物分析服务可满足多肽、单克隆抗体(IgG1/IgG2/IgG4)、双特异性抗体、ADC药物、融合蛋白、PEG化蛋白、酶、重组蛋白疫苗、干扰素、胰岛素等蛋白类药物一级结构、高级结构及其他理化性质的分析与研究,并符合国内外IND与NDA申报。

服务项目

服务内容

  • 蛋白一级质谱结构表征

    1.分子量:完整蛋白分子量、脱糖完整蛋白分子量、还原蛋白分子量、脱糖还原蛋白分子量

    2.还原肽图:序列覆盖率、N/C端氨基酸序列确认、翻译后修饰鉴定、质量肽图、N糖位点确认

    3.非还原肽图:二硫键配对分析

    4.质谱法游离糖谱鉴定:N-糖谱分析

  • 蛋白高级结构表征

    CD、DSC、FLR、FTIR、DLS

  • 其他理化性质

    氨基酸组成、消光系数、游离巯基、Edman N端测序、SEC-MALS

研究策略与流程

分子量分析包括完整蛋白及脱糖完整蛋白分子量,还原蛋白及脱糖还原蛋白分子量分析。完整蛋白及脱糖完整蛋白分子量分析可以快速地获得单抗药物的整体组成及主要的翻译后修饰信息等;还原蛋白分子量包括还原蛋白与脱糖还原蛋白分子量,蛋白质样品通过还原剂,如DTT还原成轻链与重链后进行质谱分子量检测,可以进一步获得在轻链与重链水平上的整体氨基酸组成与相应的主要翻译后修饰信息等。

图1 完整蛋白分子量:从上至下分别为TIC、Mass spectra及Deconvoluted mass图谱

图2 脱糖完整蛋白分子量:从上至下分别为TIC、Mass spectra及Deconvoluted mass图谱

结论:完整蛋白及脱糖完整蛋白分子量实测分子量值与理论氨基酸序列对比后,表明蛋白样品含有N糖基化修饰,主要糖型种类为G0F、G1F与G2F,且有N端谷氨酰胺(Q)发生焦谷氨酸化(Pyro Q)。

图3 还原蛋白分子量:从上至下分别为TIC、Mass spectra及Deconvoluted mass

图4 脱糖还原蛋白分子量:从上至下分别为TIC、Mass spectra及Deconvoluted mass图谱

结论:还原蛋白分子量实测值与理论氨基酸序列对比后,表明蛋白样品含有N糖基化修饰,主要糖型种类为G0F、G1F与G2F,N端谷氨酰胺(Q)发生焦谷氨酸化(Pyro Q),与完整蛋白分子量分析结果一致。根据脱糖还原蛋白分子量实测值,轻链分子量值脱糖前后保持一致,而重链由脱糖前的多种分子量类型变成单一分子量类型,确证N糖基化修饰存在于重链上。

相关仪器及设备

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