技术共探丨应对生物制品安全性挑战，从病毒清除验证开始！

IND过程一般至少选择X-MuLV和MVM两种病毒。该阶段通常需要对关键工艺步骤进行病毒去除和灭活验证。BLA过程则需要进行全面系统的验证，其至少需要4种模型病毒，例如MVM、X-MuLV、PRV和Reo-3。此过程中，需要结合色谱介质的使用寿命完成对整个工艺的病毒去除/灭活验证，从而保证整个下游工艺在病毒清除方面的稳健性。

一个有效的工艺步骤应当在两个独立的验证研究中能够复现相同的病毒灭活/去除量。生产工艺对病毒的总灭活/去除效果应为单个步骤灭活/去除效果之和，应当使用具有不同特性的非特异性“模型”病毒进行病毒清除特性研究。

生产工艺操作参数在一定范围内变化时，对于病毒清除效果也会存在差异。因此，在进行病毒清除工艺的验证中，为了覆盖生产工艺操作参数的整个范围，对于一些影响病毒清除效果的关键操作参数，研究者可采用最差操作条件从而保证清除工艺的稳健性。

总的来说，病毒清除服务需要根据具体项目所处的阶段和对应的法规要求进行。研究者应根据客户的现有工艺，选择有针对性的病毒灭活/去除步骤，通过构建尽量接近实际生产水平合理的缩小模型和添加合适的模式病毒进行工艺实验的验证，运用TCID50和qPCR方法测定病毒滴度，以验证客户工艺的病毒清除效果，确保产品没有病毒污染。

通过病毒感染性试验确定病毒滴度，是每个步骤的主要病毒清除效率评估方法。为了避免高估灭活/去除效果，应分别评价缓冲液和制品在病毒滴度检测方法中的毒性和干扰作用。

细胞毒性研究则是根据工艺中间品对指示细胞形态的影响来判定样品对细胞的毒性。病毒干扰研究需要在指示病毒中加入工艺中间品，用已知量的病毒去侵染细胞，通过对比病毒滴度的变化来评估病毒干扰性。检测病毒滴度需要提前做细胞毒性和干扰性实验，保证病毒滴度测定的准确性。