FDA指南解读！CAR-T 细胞产品开发在CMC阶段的五大注意事项

2020年1月 “Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs)”，即GT CMC指南，为载体的生产和检测提供了建议。申请IND，必须根据cGMP标准生产载体，并且分析方法需验证；申请BLA审查期间，载体生产设施将接受检查。FDA建议描述载体结构、主细胞库和工作细胞库的表征和测试、参考物质的表征、载体生产和检测以及载体稳定性。载体批次放行检测应包括安全性、鉴定、纯度和效价的测量。此外，FDA建议载体批次放行测试包括检测载体浓度，优化T细胞转导以确定每个细胞需要加入的载体量，以达到CAR-T细胞制剂中CAR阳性细胞的目标百分比。

2020年1月指南“GT CMC指南”中说明了生产体外修饰细胞的建议：早期产品表征（IV.A）、杂质特性（V.A.3.b.i和ii）、生产工艺开发（V.A.2.f和V.B.2.c）和设施考虑（V.C.1）。本指南为CAR-T细胞生产和检测提供了具体建议和额外细节。

CAR-T细胞生产工艺控制

流式细胞术可以在整个生产过程中评估CAR-T细胞多种属性（例如，细胞活力、特性、纯度、强度）。在开发过程中使用的流式细胞术，应提供方法的可靠和可重复的结果。

FDA建议提交初始IND时，包括：1）分析说明，包括抗体组合和用于确定检测到的每个细胞群的门控策略。建议收集最终产品中相关细胞群信息，包括预期不会产生治疗效果的细胞（如残留肿瘤细胞，如适用）。2）仪器校准和验证，以确保结果的准确性。3）分析控制清单，可能包括：用于计算补偿值的单染色补偿控制；荧光负一（FMO）控制，以确定小种群的荧光扩散和选通边界；和同型对照以确定非特异性结合。

作为分析开发的一部分，建立并实施书面程序，以确保正确的样本染色、采集和数据分析。建议进行抗体滴定以确定最佳抗体稀释度。

FDA建议直接检测CAR，以确定CAR阳性细胞的百分比。如果通过替代蛋白表达（如检测共表达基因）或其他广泛特异性试剂（如蛋白L）检测到CAR，则应证明与CAR表达的相关性。

必须进行批次放行流式细胞术的综合验证研究，以支持上市。该验证研究应按照ICH Q2进行，并验证用于CAR-T细胞放行的流式细胞组合中每个荧光标记物。稳健性研究应包括确定染色前以及染色和采集之间样品的最大保持时间。

 CAR-T细胞的标签

IND产品必须贴上标签，并注明“警告：新药——受美国法律限制用于研究用途”。FDA建议标签包括产品名称、制造商信息以及“请勿过滤”和“请勿辐照”警告。用自体起始材料制造的CAR-T细胞必须贴上“仅供自体使用”的标签。根据对自体起始材料进行的供体检测和筛查，自体CAR-T细胞的标签必须注明“未评估感染性物质”，除非已根据21 CFR 1271.75、21 CFR 1271.80和21 CFR 1271.85（21 CFR 1271.90(c)(2)）进行了所有其他适用的筛查和检测。如果进行的筛查或测试结果表明存在相关传染病病原体和/或相关风险因素或临床证据，则CAR T细胞也必须贴上21 CFR 1271.3(h)中所示的生物危害图例。如果CAR-T细胞表达多个转基因元件，则效价测定应测量每个功能元件的活性。

CAR-T细胞产品生命周期中的变化，包括最终容器、培养过程中使用的细胞因子或细胞扩增持续时间的变化，都可能会影响产品质量、安全性、功效或稳定性，FDA建议申请人在考虑此类变更时与OTAT沟通。

在规划此类变更时，一般建议申请人考虑以下事项：

1）载体生产过程的重大变化（例如，从贴壁培养到悬浮培养）应得到可比性研究的支持，评估此类变更对载体和CAR-T细胞的影响，应包括对变化前后载体的并行分析。

2）对于培养基中生长因子或添加物浓度或类型的变化，应进行更稳健的可比性研究。

3）当CAR-T细胞或载体生产设施发生变化时，应建立生产设施之间的可比性。

变更管理

关键实施及产品开发阶段变更，应进行风险评估，该风险评估应告知是否需要进行分析性可比性研究。FDA建议在启动可比性研究或实施变更之前，将拟议变更的细节、伴随的风险评估和拟议变更管理策略作为修订提交到IND，建议申请人与OTAT讨论研究设计和验收标准。可根据ICH Q5E中描述的一般原则，评估CAR-T细胞变化前后的分析可比性。

如果没有足够的证据证明分析的可比性，则可能需要进行新的非临床或临床研究，这可能会推迟产品批准。如果开发后期变更，且没有支持BLA的额外临床研究计划，则分析可比性研究应与批准产品进行的研究一样全面和彻底。

可比性研究设计

FDA建议，拟议的分析方法适用于检测变更对产品安全性和有效性的潜在影响。用拟议变更生产的产品能满足当前放行标准的证明通常不足以建立可比性。应使用适当的统计方法和预定义的验收标准进行分析。进行批次放行测试的属性外，还应使用可靠的分析方法监测各种产品属性，包括细胞表面标记。

由于自体CAR-T细胞的细胞起始材料固有的变异性，使用历史批次来评估可比性可能不够。FDA建议尽可能使用相同的细胞起始材料，通过并行测试来评估CAR-T细胞的可比性。如使用来自健康供体的CAR T细胞进行可比性研究，当健康供体生产的产品不足以评估自体CAR-T细胞的产品可比性，可比性研究还应包括对由患者细胞起始材料生产的CAR T细胞的评估。

单点生产

收集细胞起始材料，并将其运送集中生产点生产CAR T细胞。CAR-T细胞随后被运送到本地或远程临床地点进行给药。单点生产可能降低因设施之间差异而产生的产品可变性。

多中心生产

多中心生产可以缩短从细胞起始材料收集到自体产品给药时间；然而，制造设施之间差异可能会导致产品可变性，申请人应该证明在每个中心生产的产品有可比性，以支持临床试验结果分析。FDA建议在可能的情况下，在整个生产设施中使用相同的标准操作程序（SOP）、培训、试剂和设备，还建议IND描述各生产场所制造过程中的任何差异。FDA建议提交数据，最好是来自使用相同细胞起始材料在每个中心进行鉴定，以证明每个中心生产的产品的分析可比性，包括用于测试的方法列表和用于确定分析可比性的预定义验收标准。

多中心测试

FDA建议使用分析转移方案以确保在每个测试点进行的非药典试验适用于预期目的，并且在所有测试间可重复, 例如，流式细胞术。FDA建议在可能的情况下，在测试点中使用相同的SOP、试剂和设备。

当前，CAR-T疗法已经成为众多药企进行管线布局突破创新的战略要点。伴随这一疗法的快速迭代与技术升级，CAR-T细胞产品的质量控制问题也越来越受到行业的广泛关注。

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